核酸检测产品琳琅满目，如和挑选一款好用的核酸检测产品？回答完如下几个问题你心中自然就有答案。
1.核酸提取or免提取？
2.化学提取or物理超声破碎提取？
3.手动、半自动、全自动？
4.等温or变温？
5.核酸扩增产物泄露风险如和避免？
一、核酸检测试剂是否需要提取纯化？
核酸检测原理是：采用DNA聚合酶在引物的作用下对模板DNA/RNA(需要反转录成DNA)进行链式反应扩增后检测释放的荧光信号的多与少来判断样本中是否含有待检测的病原的核酸（DNA/RNA）。
1) 未经过提取或纯化的样本可能含有很多影响最终结果的成分存在：核酸酶（可以降解目的核酸导致假阴）、蛋白酶（可以降解DNA聚合酶导致假阴）、重金属盐（导致聚合酶失活导致假阴）、PH过酸或过碱性（可能导致反应不能进行）、不完整的RNA(导致反转录失败假阴)。
2) 有些样本直接扩增很难：革兰氏阳性菌和一些寄生虫，由于就有较厚的细胞壁等结构，如果不经过核酸提取纯化过程，免提取试剂盒针对此类样本时可能会失效。
所以，建议选用配置核酸提取步骤的检测试剂盒或仪器。
二、化学提取还是物理超声破碎提取？
一般来说化学提取基本能够适用大部分样本的预处理及提纯。但是在细胞壁厚的革兰氏阳性细菌和一些寄生虫中同样存在化学提取不能得到有效核酸模板的情况出现，导致检测假阴的出现。另外化学提取常采用强碱试剂，如果洗脱不彻底，容易在反应体系中引入强碱导致结果不准。
而超声破碎采用物理破碎的方式，在人用POCT领域，龙头企业赛沛GeneXpert采用超声物理破碎的方式已经有成功先例，并在一些复杂样本（比如结核杆菌）的核酸提取中都占有绝对优势。
所以，建议选用配置核酸提取步骤的检测试剂盒或仪器，如果有超声提取模块为最优。
三、手动、半自动、全自动？
这是一个人工成本及工作效率的问题，目前宠物医院相对人手不是很足，核酸提取及检测又是一个需要一定技巧和经验的工作，毫无疑问，全自动样本进结果出的核酸提取检测一体机是完美选择。
四、等温扩增or变温扩增？
扩增反应是核酸检测环节，这个环节涉及的专业技术相对比较复杂，总体来说都是利用酶对核酸进行扩增放大，放大过程中对释放的荧光信号或者嵌入的荧光信号进行检测，一般来说荧光信号越早出现，表示样本中目的基因含量越大。
恒温扩增是在恒定温度下进行核酸扩增，而变温扩增是严格按照变性–退火–延伸进行循环扩增。恒温扩增的时间一直在进行，而变温扩增的时间受到仪器升降温度的速率影响差异较大（目前很多厂家已经能做到30分钟左右扩增40个循环）。
如果实验室条件较好，分区严格，按理来说两者准确性差异并不会很大。但是变温扩增相对来说会在更短的时间内合成更多的核酸产物。对于没有严格分区及专业培训人员的实验室，发生核酸气溶胶泄露的风险会更大，一旦泄露假阳性就出现，而且极难消除。
另外，恒温扩增在样本复杂时也更容易出现非特异性扩增（相对反应的温度更低，相对而言延伸温度越高引物结合特异性越好）。
就目前技术而言，变温扩增相对更加靠谱。
五、核酸扩增产物泄漏风险如何避免？
目前很多厂家选用压盖式PCR管作为核酸反应管，这种管子，通过摩擦力来密闭，变温PCR扩增中温度变性时达到90℃以上，反复的热胀冷缩过程对pcr管子的密封性是很大挑战，压盖式pcr管子相对而言是比较容易导致泄漏情况发生。
最好采用全封闭的试剂盒/管来进行反应可以避免反应产物泄露的发生。如果能做到核酸提取和检测一体的全封闭试剂盒那是最完美不过。
纽太新推出的全自动核酸提取检测一体机完美具备以上五种最优选择。
1) 核酸提取检测一体，样本进结果出；2) 11个独立腔室预置核酸提取试剂及磁珠，核酸提取步骤一步不省；3) 核酸反应管内全封闭反应，无泄露风险 ;4) 超提物理破碎提取，温和纯度高，检测更准
发布时间: 2023-08-09
